目前，大部分的细胞检测方法采用的仍然是传统的终点法——仅仅给出结果，而且往往需要标记细胞和破坏细胞。这种方法无法得到细胞在生长时的真正状态，也无法对细胞的生长过程做出动态的监测和分析。美国Essen公司开发了第三代长时间实时动态活细胞成像分析仪——IncuCyte S3，用一种非侵入式的方法，记录细胞的实时生长状态。这种成像方法，被称为“实时细胞内涵成像”（Live Content Imaging），扩充了用户记录和理解细胞生长、细胞行为和细胞形态的途径。 与第一代成像仪IncuCyte FLR相比，IncuCyte S3是全新设计的，增加了很多关键的性能，包括支持多通道荧光成像，支持多物镜选择，增加了形态处理的能力和达到更高的速度。新增的特性有：1）IncuCyte 可支持高清晰度（HD）相差、黄绿荧光和红色荧光自动成像功能，图像处理软件支持对三通道成像的整合处理；2）用户可在1分钟之内自行更换4×、10×和20×物镜，而无须专业人员的帮助；3）因为拥有12个全核处理器和新的软硬件，其成像速度达到了第一代FLR的两倍；4）采用了新的相机设计，使其更适合长时间观察；5）设计了新的数据库，使用户能更方便的查找和检索实验数据；6）增加了数据的存储量，配备了9TB的存储空间，并支持外部数据存储系统；7）提高了空气流速，改善了散热性能，增加了扫描时间；8）增加了系统监控，整合了湿度传感器、加速计来监测不可接受的震动、风扇速度和内部温度；9）用户可用位于控制机前部的LCD控制面板方便地检测和运行基础状态检查和操作。图2：IncuCyte内部结构，支持超过200种标准培养容器，可同时观察多达6块培养容器图3：IncuCyte记录的细胞的相差图像和增殖曲线 图3是IncuCyte记录的细胞增殖的相差图像和增殖曲线。左侧图像是在同一视野内间隔12小时拍摄的CHO细胞的相差图像，图像可以24小时连续生成，而无需将细胞移出培养箱。右侧的增殖曲线是依据间隔3小时的图像生成的，由软件自动将图像数据转换成定量的饱和度vs.时间的数据，生成动态的增殖曲线。最后图像会被导出成单独的JPEG文件或视频。 　　IncuCyte软件功能：用户可以在任何一台联网的计算机上操控仪器，而无需反复拿进拿出标本及出入细胞房，这使IncuCyte成为了一个“虚拟的培养箱”。IncuCyte特点之一就是直觉式的软件界面设计。用户可以在软件的操作界面上定义耗材的类型、拍摄的时间、位置及视野个数。支持在长时间拍摄过程中插入其他拍摄任务继续进行拍摄，以充分利用仪器。IncuCyte可以自动对焦，自动进行图像收集。对得到的图像也可以进行亮度、尺寸、对比度的显示控制。用户可以自定义样本信息，进行分组分析，并可以电子化标记器皿，设定关键词，必要时可用设定的关键词搜索数据库，方便查询过去任何时间得到的图像和数据。用户还可以直接从软件中抓取图像、图表、曲线至Word、Excel、Powerpoint和Email中。生成的所有数据均可存档，并且数据和图表可以打包封存，便于用户带回家分析。IncuCyte 的新特性包括多荧光图像处理模块和新的相差成像处理模块。S3还设计了新的数据库，使用户能更容易查找和检索实验数据。 图4：软件操作界面 IncuCyte的应用： （一） 监测细胞增殖（Proliferation） 可监测细胞的饱和度，或用荧光标定细胞核，计算细胞核的个数。 关键特性：1）IncuCyte 结合NucLight Red和NucLight Green试剂，直接监测细胞增殖；2）在4×、10×或20×物镜条件下对细胞核进行实时计数；3）每个时间点可提供576个（96孔板）和2304个（384孔板）孔的数据；4）自动进行图像获取和处理；5）可计算基于细胞核计数的倍增时间，而无须lift细胞；6）可得到生长因子对原生细胞（primary cells）和长生细胞（immortalized cells）增殖的影响；7）细胞不离开培养箱，所有数据均有图像和影片验证。图5：转染NucLight Red lentivirus试剂的HT-1080细胞用不同浓度的Cycloheximide，CHX处理，在4×条件下用S3每3小时拍摄一次。虽然没有观察到细胞形态的变化，但观察到基于浓度的细胞增殖的抑制。曲线下面积（AUC）值被用于计算化合物的IC50值。倍增时间通过计算指数生长公式得到。下方的图像为48hr时的荧光图像。图6：HUVEC细胞用NucLight Red lentivirus试剂转染，血清饥饿2hr后用含1